测定法分说详尽罗致上述两种浓度的综合比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，磨炼美体注入液相色谱仪，健身测定，器亚用外标两点法对于数方程合计，育登即患上
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的综合比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，磨炼美体注入液相色谱仪，健身测定，器亚用外标两点法对于数方程合计，育登即患上。综合
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的磨炼美体比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，健身注入液相色谱仪，器亚测定，育登用外标两点法对于数方程合计，即患上。
供试品溶液的制备取益母草颗粒，混匀，研细，取约0.7g，详尽称定，置100ml 烧杯中，加热水15ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱(内径1.5cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇 -氨水(70∶30)100ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
供试品溶液的制备取益母草颗粒，研匀，取0.8g，详尽称定，置100ml烧杯 中，加热水20ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳离子 交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水200ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)200ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量 瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (2∶98)为行动相；流速为每一分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95 ℃，空气流速：1.9L/min)。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
比力品溶液的制备取105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽称定， 加行动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.1mg的溶液，即患上。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽 称定，加行动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.15mg的溶液，即患上。
40、中， 加热水20ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)150ml 洗 脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0093 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0094 实施例 8 益母草口服液含量测定措施 0095 色谱条件与系统适用。
3一、 1 3， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内 径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 200ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)200ml 洗脱， 群集 洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤 膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0068 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0069 实施例 3 益母草片含量测定措施 0070 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽 称定，加行动相制成每一1ml分说含0.1mg、0.2mg的溶液，即患上。
供试品溶液的制备取益母草流浸膏，混匀，取5g，详尽称定，置100ml烧杯 中，加热水50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳离子 交流树脂柱(内径2cm，柱高10cm)，用水400ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水 (70∶30)400ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量 瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (3∶97)为行动相；流速为每一分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：120 ℃，空气流速：3L/min)。
3八、， 即患上。 0087 供试品溶液的制备取益母草膏， 混匀， 取 1.5g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水 30ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内径 1.5cm， 柱高 6cm)， 用水 150ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)100ml 洗脱， 群集 洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤 膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0088 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪。
30、谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (6 94) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.5ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 90， 空 气流速 ： 2.8L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B6/8 页 8 0066 比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称 定， 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即患上。 0067 供试品溶液的制备取益母草颗粒， 研匀， 取 0.8g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯中， 加热 水 20ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至。
对于益母草的品质把握措施，在现有手艺中也公然良多，中国药典2005年版一 部中的益母草及益母草膏尺度均接管薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量，但该措施 操作啰嗦、检测锐敏度低、一再性欠好，倾向较大；有报道接管高效液相色谱法测 定药材或者制剂中盐酸水苏碱的含量，接管了磺酸基键合硅胶柱、阳离子交流树脂柱、 氨基键合硅胶柱等色谱柱及紫外检测的措施法停止测定，这些措施中所运用的柱子 巩固性较差，紫外波长筛选结尾罗致作为测定波长，噪音大，干扰较严酷，从而使 全副措施重现性欠好。本缔造突破原有文献公然的品质把握措施，含量测定措施依 据试验下场表白其详尽度、巩固性、重现性优异，可能更实用地把握益母草及其制 剂的产物格量。
八、薄层扫描法测定盐酸水苏碱的含量， 但该措施操作烦 琐、 检测锐敏度低、 一再性欠好， 倾向较大 ； 有报道接管高效液相色谱法测定药材或者制剂中 盐酸水苏碱的含量， 接管了磺酸基键合硅胶柱、 阳离子交流树脂柱、 氨基键合硅胶柱等色谱 柱及紫外检测的措施法停止测定， 这些措施中所运用的柱子巩固性较差， 紫外波长筛选末 端罗致作为测定波长， 噪音大， 干扰较严酷， 从而使全副措施重现性欠好。本缔造突破原有 文献公然的品质把握措施， 含量测定措施凭证试验下场表白其详尽度、 巩固性、 重现性良 好， 可能更实用地把握益母草及其制剂的产物格量。 缔造内容 0004 本缔造目的在于提供一种益母草含量测定措施。。
测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
比力品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽称定，加流 动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.15mg的溶液，即患上。
分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液10μl，注入液相 色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与此外组分抵达基线，实际塔板 数按盐酸水苏碱合计大于10000，盐酸水苏碱保存光阴约为10分钟，见表1。
1五、最后用水洗至流出液呈中性。 0023 本缔造与公然的措施停止了比力 ： 比力措施 1) 用高效液相色谱法测定益母草颗 粒中的盐酸水苏碱含量， 接管氨基柱或者磺基柱、 紫外检测器检测， 选用的波长为紫外结尾吸 收， 基线不巩固， 干扰严酷， 且氨基柱或者磺基柱易水解， 使柱效飞腾， 影响分说服从， 见附图 1 ； 比力措施 2) 用氨基柱、 蒸发光散射检测器对于盐酸水苏碱含量停止测定， 但氨基柱易水 解， 导致试验历程之中基线。本缔造的措施选用巩固性好的十八烷基硅烷 键合硅胶反相色谱柱， 接管 HPLC-ELSD 法对于益母草及其制剂中的盐酸水苏碱停止含量测定 钻研， 下场基线、 分说度好， 见附图 3。措施学验证表白， 该法分说服从优异， 措施线性、 巩固性、 一再性、 加样收受接管率等措施学审核均适宜定量测定的恳求。 附图剖析 0024 附图 1 氨基柱， 紫外检测器测定图谱 说 明 书 CN 101474249 B3/8 页 5 0025 附图 2 氨基柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 0026 附图 3 十八烷基硅烷键合硅胶柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 0027 下面实施例用于进一步剖析本缔造的手艺妄想以及手艺服从。 0028 实施例 1 ： 益母草药材含量测定 0029 仪器 ： 日本岛津 LC-10Atvp 高效液相色谱仪， 威玛龙色谱使命站 ； 美国奥泰 EL。
本缔造目的在于提供一种益母草含量测定措施。本缔造另一目的在于提供一种 益母草制剂含量测定措施。
行动相的流速为每一分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130 ℃，空气流速：1.5-3.2L/min。
供试品溶液的制备取益母草滴丸内容物，混匀，取0.5g，详尽称定，置100ml 烧杯中，加热水20ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再用甲醇- 氨水(70∶30)150ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
试验条件色谱柱：十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱Agilent ZORBAX SB-Aq 5μm 4.6×250妹妹色谱柱；行动相：乙腈-水(5∶95)综合磨炼健身器，流速：0.3ml/min；漂移管温度： 75℃，空气流速：2.2L/min；柱温：室温。
3九、， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0089 实施例 7 益母草滴丸含量测定措施 0090 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (4 96) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.8ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 110， 空 气流速 ： 2.9L/min)。 0091 比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称 定， 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.04mg、 0.08mg 的溶液， 即患上。 0092 供试品溶液的制备取益母草滴丸内容物， 混匀， 取 0.5g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯 。
分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液及不含益母草的 阴性样品溶液各20μl，注入液相色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与此外组分抵达基线，实际塔板数按盐酸水苏碱合计大于10000，盐酸水苏碱保存时 间约为10分钟，见表2。阴性样品溶液在色谱在照应位置无罗致峰，可见阴性无干 扰。
2三、阳离子交流 树脂 ( 国药总体化学试剂有限公司 )。 0043 样品 ： 益母草颗粒(批号 ： 1508001)及缺益母草药材的阴性对于仍是品， 广西灵峰药 业有限公司。 0044 比力品溶液的制备详尽称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品 10.01mg， 置 10ml 量瓶中， 加行动相使消融并稀释至刻度， 摇匀 (1.001mg/ml) ； 详尽量取 0.5ml、 1.5ml 分说置 10ml 量瓶， 加行动相至刻度， 摇匀， 即患上 (50.05g/ml、 150.15g/ ml)。 0045 供试品溶液的制备取益母草颗粒， 混匀， 研细， 取约 0.7g， 详尽称定， 置 100ml。
2八、品， 之外标两点法对于 数方程合计样品中盐酸水苏碱的含量， 下场见表 3。 0055 表 3 样品测定下场 0056 0057 剖析本缔造的措施适宜于种种益母草制剂的含量测定。 0058 详细实施例如下 ： 0059 实施例 1 益母草药材含量测定措施 0060 色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (4 96) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.4ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 80， 空 气流速 ： 2.4L/min)。 0061 比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 加行动相 制成每一 1ml 分说含 0。
1八、) ； 详尽量取 0.6ml、 2ml 分说置 25ml 量瓶， 加行动相至刻度， 摇匀， 即患上 (47.64g/ml、 158.8g/ml)。 0033 供试品溶液的制备取益母草粉末 ( 过三号筛 ) 约 0.5g， 详尽称定， 置具塞锥形瓶 中， 详尽退出乙醇 50ml， 密塞， 称定份量， 加热回流 1.5 小时， 放冷， 再称定份量， 加乙醇补足 减失的份量， 摇匀， 滤过。详尽量取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加行动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0034 试验条件色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱 Ag。
4一、性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (6 94) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.3ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 95， 空 气流速 ： 2.6L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B8/8 页 10 0096 比力品溶液的制备取 105干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称定， 加流 动相制成每一 1ml 分说含 0.7mg、 0.14mg 的溶液， 即患上。 0097 供试品溶液的制备取益母草口服液， 混匀， 详尽量取 2ml， 置 100ml 烧杯中， 加热水 15ml稀释， 用稀盐酸调pH值至13， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子。
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (4∶96)为行动相；流速为每一分钟0.8ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：110 ℃，空气流速：2.9L/min)。
审核了甲醇-水以及乙腈-水等差距的行动比力例及差距的行动相流速，下场行动 相为乙腈-水(1-10∶99-90)或者甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每一1分钟0.1ml至1ml， 盐酸水苏碱均能分说；以行动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或者甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速为每一1分钟0.2ml至0.8ml，服从更优。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，加流 动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.2mg的溶液，即患上。
3六、干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称 定， 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.08mg、 0.16mg 的溶液， 即患上。 0082 供试品溶液的制备取益母草流浸膏， 混匀， 取 5g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯中， 加热 水 50ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内 径 2cm， 柱高 10cm)， 用水 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)400ml 洗脱， 收 集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔 滤膜 (0.45m) 滤。
测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基或者辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以 1-10∶99-90的乙腈-水或者2-12∶98-88的甲醇-水为行动相；蒸发光散射检测器检测。
高效液相色谱-蒸发光散射测定法搜罗色谱条件与系统适用性试验，比力品溶液 的制备，供试品溶液的制备以及盐酸水苏碱的含量测定步骤。
试药：盐酸水苏碱化学比力品(含量测定用，批号：11，中国药品 生物废品检定所)，纯度经魔难适宜含量测定用化学比力品的手艺恳求，含量为 99.07％；甲醇(色谱纯)，乙腈(色谱纯)，水(重价双蒸水)，氨水(剖析纯)，732 型强酸性阳离子交流树脂(国药总体化学试剂有限公司)。
2一、次， 盐酸水苏碱峰面积的相对于尺度倾向为 0.52， 表白精 密度较好。巩固性试验 ： 比力品溶液合计相对于尺度倾向， 平均值为 899675， RSD 为 1.69， 表白比力品溶液在 71h 内巩固性较好 ； 供试品溶液合计相对于尺度倾向， 日内差平均值为 260766， RSD 为 1.18， 白昼差平均值为 2590279， RSD 为 1.22， 表白供试品溶液在 95h 内 说 明 书 CN 101474249 B4/8 页 6 巩固性较好。一再性试验 ： 合计盐酸水苏碱的含量平均值为 0.978， 相对于尺度倾向 RSD 为 1.56， 表白措施一再性较好。加样收受接管率试验 ： 平均收受接管率。
供试品溶液的制备取益母草粉末1g，置具塞锥形瓶中，退出乙醇50ml，密塞， 称定份量，加热回流3小时，放冷，再称定份量，加乙醇补足减失的份量，摇匀， 滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加行动相使消融，转移至10ml量瓶并稀 释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即患上。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上亚美体育登录。
七、益母草及其制剂的品质把握措施， 特意波及益母草及其制剂的含量测 定措施。 布景手艺 0002 益母草， 又名茺蔚、 坤草， 是一种木本植物。性微寒， 味苦辛， 可去瘀生新， 活血调 经， 利尿消肿， 是历代医家用来治疗妇科疾病之要药。今世医学钻研证实， 益母草含益母草 碱、 盐酸水苏碱、 益母草定、 益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、 氯化钾等。 据今世临床及植物 实施证实， 益母草浸膏及煎剂对于子宫有强而持久的冷清熏染， 不光能增强其缩短力， 同时能 后退其冷清度以及缩短率。 0003 对于益母草的品质把握措施， 在现有手艺中也公然良多， 中国药典 2005 年版一部 中的益母草及益母草膏尺度均接管。
3五、加行动相至刻度， 摇 匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0078 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0079 实施例 5 益母草流浸膏含量测定措施 0080 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (7 93) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 90， 空 气流速 ： 2.8L/min)。 说 明 书 CN 101474249 B7/8 页 9 0081 比力品溶液的制备取五氧化二磷。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
制剂的取样量为：益母草颗粒取0.1-2g，益母草片及胶囊取0.05-0.5g，益母草 流浸膏取2-10g，益母草膏取0.2-1.5g，益母草口服液量取0.5-5ml，益母草注射液量 取0.1-1ml，其余益母草制剂取样量按含益母草生药量0.1-4g而定取样量。
1.一种益母草及含益母草制剂的含量测定措施，其特色在于，含量测定的步骤搜罗如下：益母草的含量测定措施：色谱条件与系统适用性试验：以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为行动相；流速为每一分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min；比力品溶液的制备 取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，加行动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.15mg的溶液，即患上；供试品溶液的制备 取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，退出乙醇50ml，密塞，称定份量，加热回流0.5-3小时综合磨炼健身器，放冷，再称定份量，加乙醇补足减失的份量，摇匀亚美体育登录，滤过；量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加行动相使消融，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过亚美体育登录，即患上；测定法 分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上；益母草制剂的含量测定措施：色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以2-12∶98-88的甲醇-水为行动相；流速为每一分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测，漂移管温度：60-130℃，空气流速：1.5-3.2L/min；比力品溶液的制备 取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽称定，加行动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.15mg的溶液，即患上；供试品溶液的制备 取益母草制剂内容物，研细，混匀，详尽称取或者量获适量，置100ml烧杯中，加热水10-50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好内径1～2cm，柱高5～10cm的强酸性阳离子交流树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲醇-氨水50～400ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用0.45μm微孔滤膜滤过，即患上；测定法 分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，加流 动相制成每一1ml分说含0.05mg、0.2mg的溶液，即患上。
1四、现有的制 备措施制成的制剂， 搜罗片剂， 胶囊剂， 颗粒剂， 滴丸剂， 口服液， 煎膏剂、 口含片、 丸剂、 散 剂、 栓剂、 喷雾剂、 滴剂、 贴剂、 注射液等临床或者药学上可接受的每一每一运用剂型。 0022 树脂预处置措施 ： 将树脂浸泡在水中12天， 使空虚缩短， 装入层析柱， 先用树脂 柱体积 10 倍量的 2mol/L 盐酸以 3ml/min 流速停止交流， 使其酿成氢型， 再用水洗至流出液 呈中性， 接着用树脂柱体积 10 倍量的 1mol/L 氢氧化钠溶液停止交流， 使其复原钠型， 而后 再用水洗至流出液呈中性， 接着再用树脂柱体积10倍量的1mol/L盐酸停止交流， 使其酿成 氢型， 。
比力品纯度魔难：含量为99.07％，适宜含量测定恳求，合计时按100％合计。 线性关连审核：回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白盐酸水苏碱进样 量在0.4004～4.004μg规模内线性关连优异。详尽度试验：平均值为3245634，RSD 为0.52％，表白详尽度较好。巩固性试验：表白供试品溶液在72h内巩固性较好。 一再性试验：平均值为19.58mg/袋，RSD为0.97％，表白措施一再性较好。加样回 收率试验：平均收受接管率为99.82％，RSD为1.00％，表白措施收受接管率较好。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (6∶94)为行动相；流速为每一分钟0.5ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90℃， 空气流速：2.8L/min)。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (4∶96)为行动相；流速为每一分钟0.4ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：80 ℃，空气流速：2.4L/min)。
线性关连审核：患上回归方程为：LnA＝1.58LnC+13.84，r＝0.9992。表白盐酸水苏 碱进样量在0.4004～4.004μg规模内线性关连优异，可用外标两点法对于数方程停止测 定以及合计。详尽度试验：一再进样5次，盐酸水苏碱峰面积的相对于尺度倾向为0.52％， 表白详尽度较好。巩固性试验：比力品溶液合计相对于尺度倾向，平均值为899675， RSD为1.69％，表白比力品溶液在71h内巩固性较好；供试品溶液合计相对于尺度偏 差，日内差平均值为260766，RSD为1.18％，白昼差平均值为2590279，RSD为1.22％， 表白供试品溶液在95h内巩固性较好。一再性试验：合计盐酸水苏碱的含量平均值 为0.978％，相对于尺度倾向RSD为1.56％，表白措施一再性较好。加样收受接管率试验： 平均收受接管率为103.67％，RSD为1.68％。
2四、 烧杯 中， 加热水15ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱(内径1.5cm， 柱高5cm)， 用水200ml洗脱， 弃去水液， 再用甲醇-氨水(7030)100ml洗 脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0046 阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除了益母草外其余辅料， 按制 法制成益母草阴性样品， 再取此阴性样品按上述 “供试品溶液的制备” 措施制备不含益母草 的阴性样品溶液。 0047 试验条件色谱柱 ： 十八烷基硅烷键合硅胶。
审核了甲醇-水以及乙腈-水等差距的行动比力例及差距的行动相流速，下场行动 相为乙腈-水(1-10∶99-90)或者甲醇-水(2-12∶98-88)，流速为每一1分钟0.1ml至1ml， 盐酸水苏碱均能分说；以行动相为乙腈-水(2-8∶98-92)或者甲醇-水(4-8∶96-92)， 流速为每一1分钟0.2ml至0.8ml，服从更优。
树脂预处置措施：将树脂浸泡在水中1～2天，使空虚缩短，装入层析柱，先用 树脂柱体积10倍量的2mol/L盐酸以3ml/min流速停止交流，使其酿成氢型，再用 水洗至流出液呈中性，接着用树脂柱体积10倍量的1mol/L氢氧化钠溶液停止交流， 使其复原钠型，而后再用水洗至流出液呈中性，接着再用树脂柱体积10倍量的 1mol/L盐酸停止交流，使其酿成氢型，最后用水洗至流出液呈中性。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
六、， 经由历程已经处置好内径 1 2cm， 柱 高 5 10cm 的强酸性阳离子交流树脂柱， 用水 50 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶 中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用 0.45m 微孔滤膜滤过， 即患上 ； 测定法 分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20l， 供试品溶液520l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上综合磨炼健身器。 权 利 要 求 书 CN 101474249 B1/8 页 3 益母草及其制剂的品质检测措施 缔造规模 0001 本缔造波及。
十一、CN 101474249 B2/8 页 4 0012 行动相的流速为每一分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测的漂移管温度 ： 60-130， 空气流速 ： 1.5-3.2L/min。 0013 益母草制剂的含量测定措施如下 ： 0014 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基或者辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或者 2-12 98-88 的甲醇 - 水为行动相 ； 蒸发光散射检测器检测。 0015 比力品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称定， 加行动相 制成每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即患上。 0016 。
二、 .HPLC 法测定杜仲降压片中水苏碱 的含量 .齐鲁药事 .2006,( 第 05 期 ), 冯旭等 .HPLC-ELSD 测定益母颗粒中盐酸水 苏碱的含量. 中成药 .2008,第30卷(第5期), 附件 2. 余琪等 .益母草中盐酸水苏碱的 HPLC 测 定 .中国医药财富杂志 .2006, 第 37 卷 ( 第 1 期 ),34-35. (54) 缔造称谓 益母草及其制剂的品质检测措施 (57) 摘要 本缔造公然一种益母草及其制剂的品质把握 措施， 是接管高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法， 此措施详尽度、 巩固性、 重现性优异， 可能实用地 把握益母草及其制剂的产物格量。 (51)I。
3三、脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动 相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0073 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0074 实施例 4 益母草胶囊含量测定措施 0075 色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (2 98) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 。
4五、品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 加行动相 制成每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.2mg 的溶液， 即患上。 0107 供试品溶液的制备取益母草粉末 1g， 置具塞锥形瓶中， 退出乙醇 50ml， 密塞， 称定 份量， 加热回流 3 小时， 放冷， 再称定份量， 加乙醇补足减失的份量， 摇匀， 滤过。量取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加行动相使消融， 转移至10ml量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用0.45m的 微孔滤膜滤过， 即患上。 0108 测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 说 明 书 CN 101474249 B1/3 页 11 附图 1 氨基柱， 紫外检测器测定图谱 说 明 书 附 图 CN 101474249 B2/3 页 12 附图 2 氨基柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 说 明 书 附 图 CN 101474249 B3/3 页 13 附图 3 十八烷基硅烷键合硅胶柱， 蒸发光散射检测器测定图谱 说 明 书 附 图 。
1七、SD2000ES 蒸发光散射检测器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 电子天平。 0030 试药 ： 盐酸水苏碱化学比力品 ( 含量测定用， 批号 ： 11， 中国药品生物 废品检定所 )， 纯度经魔难适宜含量测定用化学比力品的手艺恳求， 含量为 99.15 ； 乙腈 ( 色谱纯 )， 水 ( 重价双蒸水 )， 乙醇 ( 剖析纯 )。 0031 样品 ： 益母草 ( 批号 ： 080701)。 0032 比力品溶液的制备详尽称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品 19.85mg， 置 10ml 量瓶中， 加行动相使消融并稀释至刻度， 摇匀 (1.985mg/ml。
3二、 - 水 (8 92) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.1ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 70， 空 气流速 ： 1.8L/min。 0071 比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称 定， 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.1mg、 0.2mg 的溶液， 即患上。 0072 供试品溶液的制备取益母草片， 作废包衣， 研细， 混匀， 取 0.2g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水 10ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由历程已经处置好的强酸性 阳离子交流树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗。
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水(8∶ 92)为行动相；流速为每一分钟0.1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：70℃， 空气流速：1.8L/min。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽 称定，加行动相制成每一1ml分说含0.04mg、0.08mg的溶液，即患上。
仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱使命站；美国奥泰ELSD 2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。
色谱条件与系统适用性试验：以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (1∶99)为行动相；流速为每一分钟1ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：130 ℃，空气流速：3.2L/min)。
供试品溶液的制备取益母草胶囊内容物，研细，混匀，取0.2g，详尽称定， 置100ml烧杯中，加热水10ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的 强酸性阳离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)80ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移 至10ml量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
1九、ilent ZORBAX SB-Aq 5m4.6250妹妹 ； 行动相 ： 乙腈 - 水 (5 95)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管温度 ： 75， 空气流 速 ： 2.2L/min ； 柱温 ： 室温。 0035 分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 10l， 注入液相 色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与此外组分抵达基线， 实际塔板数按盐 酸水苏碱合计大于 10000， 盐酸水苏碱保存光阴约为 10 分钟， 见表 1。 0036 表 1 实际塔板数、 分说度、 保存光阴数据 0037 0038 审核了甲醇 - 水以及乙腈 - 水等差距的。
供试品溶液的制备取益母草制剂内容物，研细，混匀，详尽称取或者量获适量， 置100ml烧杯中，加热水10-50ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置 好的强酸性阳离子交流树脂柱，用水50～400ml洗脱，弃去水液，再用70∶30的甲 醇-氨水50～400ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml 量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即患上。
本缔造中所述的益母草制剂是指益母草作为质料药或者质料药之一，凭证现有的 制备措施制成的制剂，搜罗片剂，胶囊剂，颗粒剂，滴丸剂，口服液，煎膏剂、口 含片、丸剂、散剂、栓剂、喷雾剂、滴剂、贴剂、注射液等临床或者药学上可接受的 每一每一运用剂型。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (6∶94)为行动相；流速为每一分钟0.3ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：95 ℃，空气流速：2.6L/min)。
4二、交流树脂柱(内径1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50 200ml 洗脱， 群集洗 脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0098 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0099 实施例 9 益母草注射液含量测定措施 0100 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (3 97) 为行动相 ； 流。
十二、供试品溶液的制备取益母草制剂内容物， 研细， 混匀， 详尽称取或者量获适量， 置 100ml烧杯中， 加热水10-50ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由历程已经处置好的强酸性阳 离子交流树脂柱， 用水 50 400ml 洗脱， 弃去水液， 再用 70 30 的甲醇 - 氨水 50 400ml 洗脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇 匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即患上。 0017 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 。
阴性样品溶液的制备阴性样品溶液是按处方比例称取除了益母草外其余辅料， 按制法制成益母草阴性样品，再取此阴性样品按上述“供试品溶液的制备”措施制 备不含益母草的阴性样品溶液。
测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～20μl，注 入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
供试品溶液的制备取益母草粉末(过三号筛)约0.5g，详尽称定，置具塞锥 形瓶中，详尽退出乙醇50ml，密塞，称定份量，加热回流1.5小时，放冷，再称定 份量，加乙醇补足减失的份量，摇匀，滤过。详尽量取续滤液20ml，水浴蒸干，残 渣加行动相使消融，转移至10ml量瓶并稀释至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm) 滤过，即患上。
供试品溶液的制备取益母草粉末0.2-1g，置具塞锥形瓶中，退出乙醇50ml， 密塞，称定份量，加热回流0.5-3小时，放冷，再称定份量，加乙醇补足减失的份量， 摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加行动相使消融，转移至10ml量 瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即患上。
供试品溶液的制备取益母草膏，混匀，取1.5g，详尽称定，置100ml烧杯中， 加热水30ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流 树脂柱(内径1.5cm，柱高6cm)，用水150ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 100ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
比力品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，加行动相制成每一 1ml分说含0.05mg、0.15mg的溶液，即患上。
3四、95， 空 气流速 ： 1.9L/min)。 0076 比力品溶液的制备取盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称定， 加行动相制成每一 1ml 分 别含 0.03mg、 0.15mg 的溶液， 即患上。 0077 供试品溶液的制备取益母草胶囊内容物， 研细， 混匀， 取 0.2g， 详尽称定， 置 100ml 烧杯中， 加热水10ml使消融， 用稀盐酸调pH值至13， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流 树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 100ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)80ml 洗脱， 群集洗脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 。
4三、速为每一分钟 0.8ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 120， 空 气流速 ： 3L/min)。 0101 比力品溶液的制备取 105干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称定， 加流 动相制成每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.1mg 的溶液， 即患上。 0102 供试品溶液的制备取益母草注射液， 混匀， 详尽量取 0.5ml， 置 100ml 烧杯中， 加 水 10ml 稀释， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3， 经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂柱 ( 内径 1cm， 柱高 5cm)， 用水 50ml 洗脱， 弃去水液， 再用甲醇 - 氨水 (70 30)50ml 洗脱。
十、 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即患上。 0010 供试品溶液的制备取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞锥形瓶中， 退出乙醇 50ml， 密塞， 称定份量， 加热回流 0.5-3 小时， 放冷， 再称定份量， 加乙醇补足减失的份量， 摇匀， 滤过。量 取续滤液 20ml综合磨炼健身器， 水浴蒸干， 残渣加行动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即患上。 0011 测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 说 明 书 。
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本缔造公然一种益母草及其制剂的品质把握措施，是接管高效液相色谱-蒸发光散射测定法，此措施详尽度、巩固性、重现性优异，可能实用地把握益母草及其制剂的产物格量。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽 称定，加行动相制成每一1ml分说含0.08mg、0.16mg的溶液，即患上。
三、nt.Cl. (56)比力文件 魔难员 周静 (19)中华公共共以及国国家知识产权局 (12)缔造专利 权柄恳求书 1 页 剖析书 8 页 附图 3 页 CN 101474249 B1/1 页 2 1. 一种益母草及含益母草制剂的含量测定措施， 其特色在于， 含量测定的步骤搜罗如 下 ： 益母草的含量测定措施 ： 色谱条件与系统适用性试验 ： 以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水为行动相 ； 流速为每一分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测， 漂移管温度 ： 60-130， 空气流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比力品溶液的制备 取干燥至恒重的。
比力品溶液的制备取105℃干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽称定， 加行动相制成每一1ml分说含0.7mg、0.14mg的溶液，即患上。
试药：盐酸水苏碱化学比力品(含量测定用，批号：11，中国药品 生物废品检定所)，纯度经魔难适宜含量测定用化学比力品的手艺恳求，含量为 99.15％；乙腈(色谱纯)，水(重价双蒸水)，乙醇(剖析纯)。
供试品溶液的制备取益母草片，作废包衣，研细，混匀，取0.2g，详尽称定， 置100ml烧杯中，加热水10ml使消融，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的 强酸性阳离子交流树脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水100ml洗脱，弃去水液，再 用甲醇-氨水(70∶30)50ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移 至10ml量瓶中，加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
四、盐酸水苏碱比力品适量， 加行动相制成每一 1ml 分 别含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即患上 ； 供试品溶液的制备 取益母草粉末 0.2-1g， 置具塞锥形瓶中， 退出乙醇 50ml， 密塞， 称 定份量， 加热回流 0.5-3 小时， 放冷， 再称定份量， 加乙醇补足减失的份量， 摇匀， 滤过 ； 量 取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加行动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即患上 ； 测定法 分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各20l， 供试品溶液520l， 注入液 相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上 ；。
九、 本缔造另一目的在于提供一种益 母草制剂含量测定措施。 0005 益母草的含量测定措施如下 ： 0006 益母草的含量测定措施运用高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法 (HPLC-ELSD)。 0007 高效液相色谱 - 蒸发光散射测定法搜罗色谱条件与系统适用性试验， 比力品溶液 的制备， 供试品溶液的制备以及盐酸水苏碱的含量测定步骤。 0008 色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基或者辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 1-10 99-90 的乙腈 - 水或者 2-12 98-88 的甲醇 - 水为行动相 ； 蒸发光散射检测器检测。 0009 比力品溶液的制备取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，。
比力品溶液的制备详尽称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品 19.85mg，置10ml量瓶中，加行动相使消融并稀释至刻度，摇匀(1.985mg/ml)；精 密量取0.6ml、2ml分说置25ml量瓶，加行动相至刻度，摇匀，即患上(47.64μg/ml、 158.8μg/ml)。
比力品溶液的制备详尽称取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品 10.01mg，置10ml量瓶中，加行动相使消融并稀释至刻度，摇匀(1.001mg/ml)；精 密量取0.5ml、1.5ml分说置10ml量瓶，加行动相至刻度，摇匀，即患上(50.05μg/ml、 150.15μg/ml)。
测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各20μl，供试品溶液5～ 20μl，注入液相色谱仪，测定，用外标两点法对于数方程合计，即患上。
本缔造与公然的措施停止了比力：比力措施1)用高效液相色谱法测定益母草 颗粒中的盐酸水苏碱含量，接管氨基柱或者磺基柱、紫外检测器检测，选用的波长为 紫外结尾罗致，基线不巩固，干扰严酷，且氨基柱或者磺基柱易水解，使柱效飞腾， 影响分说服从，见附图1；比力措施2)用氨基柱、蒸发光散射检测器对于盐酸水苏碱 含量停止测定，但氨基柱易水解，导致试验历程之中基线。本发 明的措施选用巩固性好的十八烷基硅烷键合硅胶反相色谱柱，接管HPLC-ELSD法对于 益母草及其制剂中的盐酸水苏碱停止含量测定钻研，下场基线巩固，分说度好，见 附图3。措施学验证表白，该法分说服从优异，措施线性、巩固性、一再性、加样 收受接管率等措施学审核均适宜定量测定的恳求。
供试品溶液的制备取益母草粉末0.2g，置具塞锥形瓶中，退出乙醇50ml，密 塞，称定份量，加热回流0.5小时，放冷，再称定份量，加乙醇补足减失的份量， 摇匀，滤过。量取续滤液20ml，水浴蒸干，残渣加行动相使消融，转移至10ml量 瓶并稀释至刻度，摇匀，用0.45μm的微孔滤膜滤过，即患上。
2二、为 103.67， RSD 为 1.68。 0040 实施例 2 ： 益母草颗粒含量测定 0041 仪器 ： 日本岛津 LC-10Atvp 高效液相色谱仪， 威玛龙色谱使命站 ； 美国奥泰 ELSD2000ES 蒸发光散射检测器 ； 梅特勒 - 托利多 AB265-S 电子天平。 0042 试药 ： 盐酸水苏碱化学比力品 ( 含量测定用， 批号 ： 11， 中国药品生物 废品检定所 )， 纯度经魔难适宜含量测定用化学比力品的手艺恳求， 含量为 99.07 ； 甲醇 ( 色谱纯 )， 乙腈 ( 色谱纯 )， 水 ( 重价双蒸水 )， 氨水 ( 剖析纯 )， 732 型强酸性。
供试品溶液的制备取益母草口服液，混匀，详尽量取2ml，置100ml烧杯中， 加热水15ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树 脂柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50～200ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量瓶中， 加行动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
2五、色谱柱 Agilent ZORBAX SB-Aq5m 4.6250妹妹色谱柱 ； 行动相 ： 乙腈-水(595)， 流速 ： 0.3ml/min ； 漂移管温度 ： 75， 空气 流速 ： 2.2L/min ； 柱温 ： 室温。 0048 分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液及不含益母草的 阴性样品溶液各 20l， 注入液相色谱仪。此条件下盐酸水苏碱与此外组分抵达基线， 实际塔板数按盐酸水苏碱合计大于 10000， 盐酸水苏碱保存光阴约为 10 分 钟， 见表 2。阴性样品溶液在色谱在照应位置无罗致峰， 可见阴性无干扰。 0049 表 2 实际。
3七、过， 即患上。 0083 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0084 实施例 6 益母草膏含量测定措施 0085 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以甲醇 - 水 (10 90) 为行动相 ； 流速为每一分钟 0.2ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 110， 空气流速 ： 3.0L/min)。 0086 比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称 定， 加行动相制成每一 1ml 分说含 0.03mg、 0.18mg 的溶液。
1三、0018 行动相的流速为每一分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测的漂移管温度 ： 60-130， 空气流速 ： 1.5-3.2L/min。 0019 强酸性阳离子交流树脂柱的内径 1 2cm， 柱高 5 10cm。 0020 制剂的取样量为 ： 益母草颗粒取 0.1-2g， 益母草片及胶囊取 0.05-0.5g， 益母草 流浸膏取 2-10g， 益母草膏取 0.2-1.5g， 益母草口服液量取 0.5-5ml， 益母草注射液量取 0.1-1ml， 其余益母草制剂取样量按含益母草生药量 0.1-4g 而定取样量。 0021 本缔造中所述的益母草制剂是指益母草作为质料药或者质料药之一， 凭证。
仪器：日本岛津LC-10Atvp高效液相色谱仪，威玛龙色谱使命站；美国奥泰ELSD 2000ES蒸发光散射检测器；梅特勒-托利多AB265-S电子天平。
2九、.05mg、 0.2mg 的溶液， 即患上。 0062 供试品溶液的制备取益母草粉末 0.2g， 置具塞锥形瓶中， 退出乙醇 50ml， 密塞， 称定份量， 加热回流 0.5 小时， 放冷， 再称定份量， 加乙醇补足减失的份量， 摇匀， 滤过。量 取续滤液 20ml， 水浴蒸干， 残渣加行动相使消融， 转移至 10ml 量瓶并稀释至刻度， 摇匀， 用 0.45m 的微孔滤膜滤过， 即患上。 0063 测定法分说罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注 入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0064 实施例 2 益母草颗粒含量测定措施 0065 色。
行动相的流速为每一分钟0.1-1ml；蒸发光散射检测器检测的漂移管温度：60-130 ℃，空气流速：1.5-3.2L/min。
4四、， 群集洗 脱液， 蒸干， 残渣加行动相消融， 并转移至 10ml 量瓶中， 加行动相至刻度， 摇匀， 用微孔滤膜 (0.45m) 滤过， 即患上。 0103 测定法分说详尽罗致上述两种浓度的比力品溶液各 20l， 供试品溶液 5 20l， 注入液相色谱仪， 测定， 用外标两点法对于数方程合计， 即患上。 0104 实施例 10 益母草药材含量测定措施 0105 色谱条件与系统适用性试验 ： 以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以乙腈 - 水 (1 99) 为行动相 ； 流速为每一分钟 1ml ； 蒸发光散射检测器检测 ( 漂移管温度 ： 130， 空气 流速 ： 3.2L/min)。 0106 比力。
益母草，又名茺蔚、坤草，是一种木本植物。性微寒，味苦辛，可去瘀生新， 活血调经，利尿消肿，是历代医家用来治疗妇科疾病之要药。今世医学钻研证实， 益母草含益母草碱、盐酸水苏碱、益母草定、益母草宁等多种生物碱及苯甲酸、氯 化钾等。据今世临床及植物实施证实，益母草浸膏及煎剂对于子宫有强而持久的冷清 熏染，不光能增强其缩短力，同时能后退其冷清度以及缩短率。
五、 益母草制剂的含量测定措施 ： 色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂 ； 以 2-12 98-88 的甲 醇 - 水为行动相 ； 流速为每一分钟 0.1-1ml ； 蒸发光散射检测器检测， 漂移管温度 ： 60-130， 空气流速 ： 1.5-3.2L/min ； 比力品溶液的制备 取干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量， 详尽称定， 加行动相制成 每一 1ml 分说含 0.05mg、 0.15mg 的溶液， 即患上 ； 供试品溶液的制备 取益母草制剂内容物， 研细， 混匀， 详尽称取或者量获适量， 置 100ml 烧杯中， 加热水 10-50ml 使消融， 用稀盐酸调 pH 值至 1 3。
比力品溶液的制备取五氧化二磷干燥至恒重的盐酸水苏碱比力品适量，详尽 称定，加行动相制成每一1ml分说含0.03mg、0.18mg的溶液，即患上。
色谱条件与系统适用性试验以辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以甲醇-水 (10∶90)为行动相；流速为每一分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度： 110℃，空气流速：3.0L/min)。
2六、塔板数、 分说度、 保存光阴数据 0050 0051 审核了甲醇 - 水以及乙腈 - 水等差距的行动比力例及差距的行动相流速， 下场行动 相为乙腈 - 水 (1-10 99-90) 或者甲醇 - 水 (2-12 98-88)， 流速为每一 1 分钟 0.1ml 至 1ml， 盐酸水苏碱均能分说 ； 以行动相为乙腈 - 水 (2-8 98-92) 或者甲醇 - 水 (4-8 96-92)， 流 说 明 书 CN 101474249 B5/8 页 7 速为每一 1 分钟 0.2ml 至 0.8ml， 服从更优。 0052 比力品纯度魔难 ： 含量为 99.07， 适宜含量测定恳求， 合计时按 100合计。线、 性关连审核 ： 回归方程为 ： LnA 1.58LnC+13.84， r 0.9992。表白盐酸水苏碱进样量在 0.4004 4.004g 规模内线性关连优异。详尽度试验 ： 平均值为 3245634， RSD 为 0.52， 表白详尽度较好。巩固性试验 ： 表白供试品溶液在 72h 内巩固性较好。一再性试验 ： 平均 值为 19.58mg/ 袋， RSD 为 0.97， 表白措施一再性较好。加样收受接管率试验 ： 平均收受接管率为 99.82， RSD 为 1.00， 表白措施收受接管率较好。 0053 实施例 3 ： 益母草制剂含量测定 0054 按手艺妄想中益母草制剂的含量测定项下依法测定各制剂样。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以乙腈-水 (7∶93)为行动相；流速为每一分钟0.2ml；蒸发光散射检测器检测(漂移管温度：90 ℃，空气流速：2.8L/min)。
色谱条件与系统适用性试验以十八烷基或者辛烷基硅烷键合硅胶为添补剂；以 1-10∶99-90的乙腈-水或者2-12∶98-88的甲醇-水为行动相；蒸发光散射检测器检测。
样品：益母草颗粒(批号：1508001)及缺益母草药材的阴性对于仍是品，广西灵 峰药业有限公司。
供试品溶液的制备取益母草注射液，混匀，详尽量取0.5ml，置100ml烧杯中， 加水10ml稀释，用稀盐酸调pH值至1～3，经由历程已经处置好的强酸性阳离子交流树脂 柱(内径1cm，柱高5cm)，用水50ml洗脱，弃去水液，再用甲醇-氨水(70∶30) 50ml洗脱，群集洗脱液，蒸干，残渣加行动相消融，并转移至10ml量瓶中，加流 动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜(0.45μm)滤过，即患上。
比力品溶液的制备取盐酸水苏碱比力品适量，详尽称定，加行动相制成每一1ml 分说含0.03mg、0.15mg的溶液，即患上。
按手艺妄想中益母草制剂的含量测定项下依法测定各制剂样品，之外标两点法 对于数方程合计样品中盐酸水苏碱的含量，下场见表3。